不同物種來源的 ELISA 試劑盒（如人、鼠、兔）能否交叉使用？?
日期：2025-11-27 14:20:47
不同物種來源的ELISA試劑盒不建議交叉使用，核心原因是ELISA技術依賴“抗原-抗體的物種特異性結合”，跨物種使用會導致檢測失效、結果失真，甚至完全無法檢測。以下從技術原理、具體風險和特殊情況三方面詳細說明：
二、交叉使用的具體風險
一、核心原理：為什么不能交叉使用？
ELISA的核心是“抗原-抗體的特異性識別”，試劑盒的設計嚴格匹配目標物種的抗原序列和檢測抗體的物種兼容性，具體依賴兩個關鍵組件：
捕獲抗體/檢測抗體：試劑盒中的抗體（如抗人蛋白抗體、抗鼠蛋白抗體）是針對特定物種的抗原序列制備的——不同物種的同源蛋白（如人IL-6和鼠IL-6）雖然功能相似，但氨基酸序列存在差異（即“物種特異性差異”），針對人蛋白的抗體可能無法識別鼠蛋白（或結合能力極弱），反之亦然。
標準品：試劑盒的標準品是目標物種的純化抗原（如人源IL-6標準品），用于繪制標準曲線、定量樣本中的抗原濃度。如果用鼠源樣本檢測人源試劑盒，標準品與樣本中的抗原不是同一物種，即使抗體能交叉結合，定量結果也完全不具備參考意義（相當于用“蘋果標準”衡量“橘子含量”）。
簡單類比：人源ELISA試劑盒的抗體如同“專門識別人類指紋的探測器”，鼠源樣本的抗原如同“老鼠的指紋”，探測器無法識別；同時標準品是“人類指紋的標準模板”，無法用來量化“老鼠指紋”的數量。
二、交叉使用的具體風險
完全檢測不到信號：最常見情況——抗體與異物種抗原無結合能力，ELISA讀數接近空白（OD值與陰性對照無差異），誤以為樣本中無目標蛋白。
靈敏度極低、結果不準：少數情況下，同源蛋白序列相似度高（如靈長類與人、嚙齒類之間），抗體可能有微弱交叉反應，但結合親和力遠低于對目標物種的結合能力，導致：
檢測下限顯著升高（無法檢測低濃度樣本）；
信號強度與實際抗原濃度不線性相關，定量結果嚴重偏離真實值。
非特異性結合增加、假陽性：異物種抗原可能與試劑盒抗體發生“非特異性交叉反應”（如其他蛋白干擾），導致OD值虛高，誤判為陽性。
實驗重復性差：跨物種結合的不穩定性會導致同一樣本多次檢測結果差異極大，無法驗證數據可靠性。
三、特殊情況：僅存在“理論可能”，仍不推薦
只有兩種極端情況可能出現微弱交叉反應，但絕對不能用于科研或臨床定量：
高度保守的蛋白：部分進化上高度保守的蛋白（如一些基礎代謝酶、管家基因編碼蛋白），不同物種的氨基酸序列相似度＞95%，針對某一物種的抗體可能交叉識別另一物種。但即使有反應，也存在靈敏度低、定量不準的問題，僅能作為“定性篩查”（需后續驗證），不能替代物種特異性試劑盒。
試劑盒明確標注“交叉反應”：極少數廠家會在說明書中明確標注“可交叉檢測XX物種”（如“人/猴IL-6試劑盒”），這是因為抗體經過驗證，對兩種物種的抗原均有穩定結合能力，且標準品和檢測體系已適配。但這種情況是廠家專門設計的，并非“隨意交叉使用”——未標注的試劑盒絕對不能默認交叉。
四、總結與建議
基本原則：嚴格按照樣本物種選擇對應試劑盒（人樣本→人源試劑盒，鼠樣本→鼠源試劑盒），禁止未驗證的跨物種使用。
關鍵依據：以試劑盒說明書為準——僅當說明書明確標注可交叉檢測目標物種時，才可使用；未標注則視為無交叉反應能力。
科研/臨床要求：若需發表論文或臨床診斷，必須使用物種特異性試劑盒，跨物種檢測結果不被認可（即使有信號，也無法證明其準確性）。
ELISA試劑盒的“物種特異性”是檢測有效性的前提，交叉使用本質上違背了抗原-抗體的特異性結合原理，最終會導致數據不可靠，甚至誤導實驗結論。
