DNA甲基化通路研究獲進展
日期:2012-05-22 12:15:10
2012年5月17日,清華大學生命科學聯合中心戚益軍研究組在《Molecular Cell》在線發表題為“Cytoplasmic Assembly and Selective Nuclear Import of Arabidopsis ARGONAUTE4/siRNA Complexes”的論文。該論文報道了擬南芥RNA介導DNA甲基化(RdDM)通路中,ARGONAUTE4/siRNA復合體在細胞質內組裝和選擇性進入細胞核的分子機制。
DNA甲基化作為一種高等生物中保守的表觀遺傳修飾,在維持基因組穩定性,調控基因表達和介導轉基因沉默等生物過程中起著非常重要的作用。RNA介導的DNA甲基化(RdDM)是植物從頭建立DNA甲基化的重要途徑。在該通路中, siRNA從轉座子等重復DNA序列區域產生(這些siRNA被稱為heterochromatic siRNA, hc-siRNA),并與ARGONAUTE4(AGO4)蛋白結合形成效應復合體。AGO4/siRNA復合體可進一步招募DNA甲基轉移酶DRM2等組分,特異性地識別同源DNA序列并介導甲基化修飾。由于hc-siRNA的產生和最終功能行使都在細胞核中進行,之前人們普遍認為RdDM通路是一個完全發生在細胞核中的過程。戚益軍實驗室在對擬南芥細胞質和細胞核中的小RNA組分進行系統分析的過程中,出人意料地發現:hc-siRNA主要存在于細胞質中,并且大部分以游離的雙鏈形式存在;而在細胞核中則主要以與AGO4結合的單鏈形式存在。進一步的細胞和生化實驗證明:在細胞質內,AGO4在HSP90蛋白的幫助下結合雙鏈siRNA,然后通過其核酸內切酶活性切割并降解其中一條鏈,形成成熟的結合單鏈siRNA的AGO4效應復合體。siRNA的結合很可能導致AGO4構象發生變化,暴露出其核定位信號,細胞因此可以選擇性的識別并轉運成熟的AGO4/siRNA復合體至細胞核內。該研究揭示了RdDM通路中AGO4/siRNA效應復合體在細胞質內組裝的重要步驟,推翻了以前人們認為RdDM通路完全在細胞核內進行的成見。該研究還表明,細胞選擇性地轉運成熟的AGO4/siRNA復合體進入細胞核,很可能是RdDM通路進入效應階段之前的一個關鍵調控點。
與浙江大學聯合培養的博士生葉瑞強和博士后王偉為該論文的共同第一作者,論文的其他作者還有博士生劉暢和技術員吳揚,日本國立農業生物科學研究所的Taichiro Iki和Masayuki Ishikawa博士,以及浙江大學的周雪平博士。戚益軍博士為該論文的通訊作者,該項研究由科技部973項目資助。
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