標簽抗體概述
日期：2023-07-26 09:23:37
在介紹標簽抗體之前，讓我們簡要介紹一下蛋白標簽。蛋白標簽（protein tag）是指利用DNA體外重組技術，與目的蛋白一起融合表達的一種多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表達、檢測、示蹤和純化等。通常這些標簽可以通過化學試劑或酶的手段切割，以獲得無標簽的重組蛋白質。標簽被附著到蛋白質上有多種目的。
蛋白質標簽便于在蛋白工程中的應用，如增加溶解性、易于檢測、純化、定位和表達。蛋白質標簽通過抗體幫助識別和純化感興趣的蛋白質，它們在免疫印跡、免疫細胞化學、共免疫沉淀、流式細胞術、蛋白質純化、蛋白質相互作用、細胞超結構和蛋白質等方面有許多用途。
標簽抗體是抗原分子的特定區域或群，它決定了抗原的特異性。標簽抗體可用于檢測標簽融合蛋白的表達、細胞內定位和純化，以及標簽融合蛋白的定性或定量檢測。融合標簽可根據其相對分子質量的大小分為兩大類：大型蛋白質分子和小型多肽片段。
CUSABIO的所有標簽抗體均為親和純化的單克隆抗體，其原理是抗原-抗體反應。這些標簽抗體可以高度特異性地結合到相應的標簽蛋白上，然后通過特異性的標簽抗體識別和純化它們以進行研究。除了常見的標簽（His、Flag、GST和MBP），CUSABIO的標簽抗體還具有許多非傳統標簽，包括V5、GFP、RFP、E2、S和SUMO。這些標簽抗體具有高靈敏度、強親和力、低背景等特點，還可以長時間穩定地儲存。根據標簽的特性，我們將它們分為三組，
1. 親和標簽
這些標簽使您能夠從粗細胞裂解液中純化蛋白質，即使您沒有關于其生化性質的任何先前知識。使用特定的親和樹脂可以純化親和標記的蛋白質，而商業上可購買的抗體可以方便地用于檢測。以下是一些常用的親和標簽：
1.1 His標簽
這個標簽是一個短肽，由六個組氨酸殘基（His-His-His-His-His-His）組成。它專門設計用于親和純化重組蛋白質。His標簽的相對較小的尺寸使其非常容易整合到表達載體中。此外，由于這些標簽不會形成與底物結合的二級結構，即使在變性條件下，您也可以輕松純化感興趣的蛋白質。
由于這些特性，His融合標簽相比其他標簽具有許多優勢，是目前用于純化的最常用的融合標簽。可以使用His標簽抗體進行His標簽融合表達蛋白的檢測和表達、細胞內定位和純化，以及His融合表達蛋白的定性或定量檢測等。
CUSABIO的His標簽抗體：
應用: ELISA, WB
1.2 谷胱甘肽- s轉移酶(GST)標簽
GST可用于通過將其編碼序列插入感興趣的蛋白質旁邊來純化蛋白質。經過轉錄和翻譯后，它們將以融合蛋白的形式表達。GST標簽系統具有蛋白表達量高、表達產物純化方便、有利于制備GST抗體等特點。GST融合蛋白可溶于水溶液，可從細菌裂解液中提取，并在不變條件下通過親和層析獲得。融合蛋白又是一種非常好的強免疫原，因此很容易制備針對新蛋白的抗體。
但是GST標簽的一個缺點是它是一個30kDa的蛋白質，它的相對較大的尺寸使純化變得困難。此外，它還增加了扭曲蛋白質自然構象的風險，使它們不適合進行結構研究。為了防止這些事情的發生，可以考慮在純化后使用特定的蛋白酶從重組蛋白中切割GST基團。近年來，在原核表達系統中，谷胱甘肽S轉移酶GST表達純化系統的應用較為普遍。
CUSABIO GST標簽抗體：
應用: ELISA, WB
1.3 麥芽糖結合蛋白(MBP)標簽
MBP是大腸桿菌中天然存在的一種約42 kDa的蛋白質，由malE基因編碼，負責麥芽糊精(一種碳水化合物)的攝取、分解和運輸。最初作為蛋白質表達標簽在20世紀80年代末被開發，它是最知名和最成熟的標記在微生物中表達的蛋白質的手段之一。此外，已知它能顯著提高多種下游融合的靶蛋白的溶解度。
然而，MBP標簽提高蛋白質溶解度的確切機制尚不清楚，通常認為它是在蛋白質合成期間和之后穩定和保護其下游乘客蛋白免受蛋白水解降解。mbp融合蛋白的細胞質產量通常也較高，因為融合蛋白為高效翻譯起始提供了可靠的環境。
CUSABIO MBP 標簽抗體：
應用: ELISA, WB
1.4 鈣調蛋白結合蛋白(CBP)標簽
CBP親和標簽是一種有用的蛋白質研究標簽，可通過DNA重組技術將其添加到目標蛋白質的N或C端。該標簽來源于骨骼肌肌球蛋白輕鏈激酶。該標簽由26個氨基酸殘基組成，分子量為4 kDa，序列為KRRWKKNFIAVSAANRFKKISSSGAL。CBP相對較小的大小(4 kDa)使其非常適合在溫和的條件下快速敏感的捕捉標簽融合蛋白。CBP標簽對鈣調蛋白(CaM)具有較高的親和力。C標簽與鈣調蛋白樹脂結合，蛋白質可以用含有低濃度鈣螯合劑EGTA的中性緩沖液洗脫。CBP Tag抗體是分析CBP標記蛋白的有用工具。
CUSABIO CBP 標簽抗體：
應用: ELISA, WB
2. 表位標簽
這些標簽通常比親和標簽更小，并且能夠被抗體迅速識別。由于它們相對較小的尺寸，它們對融合蛋白的結構幾乎沒有或沒有影響。表位標簽非常適合多種下游應用，包括免疫印跡（WB）、共免疫沉淀（Co-IP）和免疫熒光實驗。以下是一些最受歡迎的表位標簽：
2.1 Flag標簽
Flag標簽是一種常用的短肽標簽（DYKDDDDK），可以融合到蛋白的C-端或N-端。該系統用于重組DNA技術，可用于親和色譜和分離具有多個亞基的蛋白質復合物，也可以與其他親和標簽一起使用。
由于Flag標簽與其它同類標簽相比更親水性，因此它們不會使附著的蛋白質變性或失活。因此，現在廣泛應用于各種細胞類型，包括細菌、酵母和哺乳動物細胞等。相應的Flag標簽抗體也被廣泛使用。Flag標簽可以通過添加腸激酶來去除，腸激酶特異性識別肽序列C-端的5個氨基酸殘基。Flag抗體可用于檢測和表達Flag標記的融合蛋白的表達情況、細胞內定位以及純化和定性或定量檢測Flag融合表達的蛋白。
CUSABIO 標志標簽抗體顯示：
應用: ELISA, WB, IF, IP
2.2 Myc標簽
與Flag標簽類似，Myc標簽是一種常用的短肽標簽（EQKLISEEDL），源自c-myc基因產物，并被許多商業抗體所識別。該標簽可以通過重組DNA技術添加到C端或N端，并可用于親和色譜和分離具有多個亞基的蛋白質復合物。此外，它還可以用于檢測細菌、酵母、昆蟲細胞和哺乳動物細胞中重組蛋白的表達。
這個經過充分驗證的Myc標簽為檢測和純化帶標簽目標蛋白提供了可靠的方法，無需特定的抗體或探針。它已成功應用于WB雜交技術、免疫沉淀（IP）和流式細胞術。Myc重組蛋白可以通過將Myc標記的抗體與二乙烯基硫酸酯活化的瓊脂糖耦合來親和純化，但是Myc重組蛋白的低pH洗脫條件往往會降低蛋白的活性，因此Myc標簽系統在檢測中被廣泛應用，但很少用于純化。
CUSABIO Myc標簽抗體顯示：
應用: ELISA, WB, IF, IP
2.3 人類流感血凝素（HA）標簽
HA（血凝素）標簽是源自人類流感病毒HA蛋白的表面糖蛋白的肽序列（YPYDVPDYA）。HA標簽系統使用HA短肽與目標蛋白融合，可以位于蛋白質的C端或N端。該系統促進了流感病毒感染宿主的能力，并被許多商業抗體所識別。它已在多種細胞類型中廣泛應用，并且相應的HA標記抗體也被廣泛使用。HA標記的抗體可以特異性識別帶有HA標簽的融合蛋白，無論其位于C端還是N端。
CUSABIO的HA標簽抗體展示：
應用: ELISA, WB, IF, IP
3. 熒光標簽 - GFP標簽
熒光標簽，也稱為熒光標記，是一種化學上附加的分子，用于檢測生物分子，如蛋白質、抗體或氨基酸。通常，熒光標記或標簽使用熒光分子的反應性衍生物，也稱為熒光染料。廣泛采用各種標記技術，如酶標記、蛋白標記和遺傳標記。乙溴化乙錠、熒光素和綠色熒光蛋白（GFP）是常見的標簽。其中，綠色熒光蛋白（GFP）是該類別中最常用的蛋白質標簽之一，因為它具有非毒性。基于這一特性，該標簽可用于檢測活細胞和固定細胞中的標記蛋白。
綠色熒光蛋白，以下簡稱GFP，最早于1962年從水母Aequorea victoria中分離出來。該蛋白表現出明亮的綠色熒光，在暴露于藍光或紫外（UV）光下不易褪色。它可以位于蛋白質的C端或N端，并已廣泛應用于細菌、酵母和哺乳動物細胞等各種類型的細胞中。相應的GFP標記抗體也被廣泛使用。
GFP及其突變體EGFP等廣泛用于檢測基因表達效率，以及與感興趣的蛋白質融合表達，用于檢測感興趣蛋白質的表達和分布。通常，GFP抗體不僅可以檢測GFP或其適當的突變體，還可以檢測GFP或其適當的突變體融合蛋白的表達、細胞內定位和純化，以及定性或定量檢測GFP融合表達蛋白等。
CUSABIO的GFP標簽抗體：
應用: ELISA, WB, IP
4. 其他標簽
除了上述的蛋白質標簽外，CUSABIO還提供了幾種不常見的標簽抗體，用于特殊的蛋白質標簽，包括Sumo標簽、Trx標簽、S標簽、E2標簽、HSV標簽等。
CUSABIO的不常見標簽抗體：
