酶標(biāo)儀的波長(zhǎng)設(shè)置需要與ELISA試劑盒的底物類型匹配嗎？?
日期：2025-12-12 13:29:04
酶標(biāo)儀的波長(zhǎng)設(shè)置必須與ELISA試劑盒的底物類型嚴(yán)格匹配，這是保證檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確的關(guān)鍵前提。
不同底物在酶促反應(yīng)后會(huì)生成特定的有色產(chǎn)物，這些產(chǎn)物的最大吸收波長(zhǎng)（λmax）是固定的，酶標(biāo)儀只有在對(duì)應(yīng)波長(zhǎng)下檢測(cè)，才能捕獲到最強(qiáng)的吸光度信號(hào)，同時(shí)避免非特異性背景干擾。
常見(jiàn)底物與對(duì)應(yīng)檢測(cè)波長(zhǎng)的匹配關(guān)系如下：
1、TMB（四甲基聯(lián)苯胺）
這是HRP（辣根過(guò)氧化物酶）標(biāo)記物最常用的底物，反應(yīng)后生成藍(lán)色產(chǎn)物；加入酸性終止液后，產(chǎn)物會(huì)變?yōu)辄S色，其最大吸收波長(zhǎng)為450nm。部分實(shí)驗(yàn)會(huì)搭配630nm作為參比波長(zhǎng)，用于扣除背景吸光度，提高結(jié)果穩(wěn)定性。
OPD（鄰苯二胺）
同樣適用于HRP標(biāo)記物，反應(yīng)后生成橙黃色產(chǎn)物，最大吸收波長(zhǎng)為492nm，終止液一般為硫酸溶液，終止后顏色會(huì)保持一段時(shí)間穩(wěn)定。
2、pNPP（對(duì)硝基苯磷酸二鈉）
2、pNPP（對(duì)硝基苯磷酸二鈉）
適用于AP（堿性磷酸酶）標(biāo)記物，反應(yīng)后生成黃色產(chǎn)物，最大吸收波長(zhǎng)為405nm，這類反應(yīng)通常不需要額外加終止液，或僅用堿性溶液終止。
如果波長(zhǎng)設(shè)置不匹配，比如用492nm檢測(cè)TMB終止后的黃色產(chǎn)物，會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)到的吸光度值偏低，無(wú)法準(zhǔn)確反映樣本中目標(biāo)物的濃度，甚至出現(xiàn)假陰性結(jié)果。
