血清樣本采集后，如何處理才能用于ELISA試劑盒檢測？?
日期：2025-12-11 09:21:52
血清樣本采集后，需通過“規(guī)范處理-避免干擾-正確保存”三步核心流程，才能保證樣本適用性和檢測結(jié)果準(zhǔn)確性，具體操作如下：
一、血清分離：核心是“及時(shí)、溫和、徹底”
采集后初步處理：血液采集到無抗凝劑的真空采血管（血清管）后，室溫靜置30-60分鐘（避免暴曬或低溫），讓血液自然凝固（形成血凝塊），切勿搖晃試管（防止溶血和凝血因子激活，干擾檢測）；
離心分離血清：凝固完成后，以2000-3000×g離心10-15分鐘（離心力不足或時(shí)間過短會導(dǎo)致血清分離不徹底，含血細(xì)胞雜質(zhì)）；離心后試管內(nèi)分為三層（上層淡黃色血清、中層白細(xì)胞/血小板、下層紅細(xì)胞），用無菌移液管吸取上層血清，避免觸及中層和下層沉淀；
避免溶血：全程操作輕柔，不劇烈震蕩、不反復(fù)凍融（溶血會釋放紅細(xì)胞內(nèi)的血紅蛋白、酶類等物質(zhì)，可能抑制抗原-抗體結(jié)合，或干擾酶促顯色反應(yīng)），若血清出現(xiàn)紅色、粉紅色（提示溶血），建議重新采集樣本。
二、樣本預(yù)處理：消除基質(zhì)干擾，適配試劑盒要求
澄清與過濾（按需）：若分離后的血清存在渾濁、絮狀物（可能是脂蛋白、纖維蛋白殘留），可再次以3000×g離心5分鐘，或用0.22μm濾膜過濾，去除雜質(zhì)（避免堵塞試劑盒反應(yīng)孔，或影響反應(yīng)均一性）；
稀釋或濃縮（按說明書）：
若樣本中目標(biāo)檢測物濃度超出試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍（過高），需用試劑盒配套的樣本稀釋液（不可用蒸餾水或生理鹽水，避免破壞反應(yīng)體系pH和離子強(qiáng)度）按比例稀釋（如1:10、1:50），稀釋后需充分混勻；
若濃度過低，可通過真空濃縮、超濾等方式濃縮（需避免高溫，防止目標(biāo)物活性喪失）；
避免外源污染：移液管、離心管需提前滅菌，操作全程在無菌環(huán)境下進(jìn)行（防止細(xì)菌、真菌污染，導(dǎo)致樣本變質(zhì)或干擾檢測）；切勿向血清中添加防腐劑、抗凝劑（如肝素、EDTA），除非試劑盒說明書明確允許。
三、樣本保存與解凍：防止目標(biāo)物降解
短期保存：分離后的血清若在24-48小時(shí)內(nèi)檢測，可置于2-8℃冷藏（冰箱冷藏室，避免靠近冷凍室），期間需密封試管（防止揮發(fā)或交叉污染）；
長期保存：若需長期存放（超過48小時(shí)），需按單次檢測用量分裝為小體積（如50μL、100μL），快速置于-20℃或-80℃冷凍保存（分裝可避免反復(fù)凍融，保護(hù)目標(biāo)蛋白/抗原活性）；
解凍方式：檢測前取出冷凍樣本，置于4℃冰箱緩慢解凍（或室溫梯度解凍），切勿直接煮沸、高溫加熱；解凍后需輕輕顛倒試管5-10次充分混勻，必要時(shí)可再次離心（3000×g，5分鐘）去除解凍后析出的沉淀，確保樣本均一性；
注意事項(xiàng)：樣本凍融次數(shù)盡量控制在1-2次內(nèi)，超過3次會導(dǎo)致目標(biāo)物活性下降、檢測值偏低；若樣本保存期間出現(xiàn)明顯渾濁、異味、沉淀無法去除，需丟棄，不可用于檢測。
所有操作需遵循試劑盒說明書的特殊要求（如部分試劑盒對血清采集時(shí)間、離心參數(shù)、稀釋比例有明確規(guī)定）；
若檢測樣本為特殊血清（如溶血血清、脂血血清、黃疸血清），需提前確認(rèn)試劑盒是否耐受（部分試劑盒含抗干擾成分，可兼容輕度異常血清，重度異常則需更換樣本）。
