表達載體構建可提供哪些融合標簽選擇,標簽切除及后續純化如何收費??
日期:2025-12-12 13:40:25
表達載體構建中的融合標簽可按親和純化、促溶、熒光示蹤的功能分類選取,標簽切除和后續純化的收費則因自主操作或委托實驗平臺服務的不同有明顯差異,具體詳情如下:

常見融合標簽
親和純化類:His標簽常以6-10個組氨酸殘基構成,6*His是最常見的類型,分子量僅約0.8kDa,基本不會影響目的蛋白的結構與功能,適配多種表達系統,依靠金屬螯合層析就能完成純化,還能和其他標簽組合使用。FLAG標簽是含8個氨基酸的親水性短肽,分子量1.0kDa,不會遮擋重組蛋白的表位和結構域,容易與抗體結合,且能被腸激酶切除,在免疫沉淀實驗中串聯使用時效果更突出。HA標簽源自流感病毒表面糖蛋白,氨基酸序列為YPYDVPDYA,分子量1.1kDa,對目的蛋白的空間結構和生物活性影響較小,常用來分離和檢測目的蛋白。Myc標簽源自原癌基因c-Myc的表達產物,氨基酸序列為EQKLISEEDL,分子量1.2kDa,可構建在目的蛋白的N端或C端,適配Western-blot、免疫沉淀等實驗來檢測和分離重組蛋白。
促溶類:GST標簽屬于分子量較大的標簽,能顯著提升原核表達系統中難溶蛋白的溶解性,后續可借助與谷胱甘肽樹脂的結合作用實現純化。SUMO標簽作為小分子泛素樣修飾蛋白,不僅能提高融合蛋白的表達量,還能抗蛋白酶水解,同時促進靶蛋白正確折疊以提升溶解性,且后續切除后不會殘留多余氨基酸殘基。MBP標簽也就是麥芽糖結合蛋白標簽,能幫助結構復雜的蛋白完成正確折疊,大幅提升蛋白的溶解性,后續需通過麥芽糖或淀粉樹脂進行純化。
熒光示蹤類:GFP即綠色熒光蛋白標簽,分子量27kDa,無需底物就能發出熒光,可實時觀察目的蛋白在細胞內的表達位置和表達情況,其變體如eGFP等也被廣泛應用。mCherry屬于單體紅色熒光蛋白標簽,有著亮度高、光穩定性好的特點,激發和發射波長與GFP類標簽區分明顯,能避免熒光信號重疊,適合和GFP標簽搭配用于多靶點蛋白的示蹤。除此之外,還有eCFP、eYFP等熒光標簽,它們有著不同的激發和發射波長,適配不同場景下的蛋白示蹤需求。
標簽切除的收費:若自主操作,需購買專用蛋白酶,這類蛋白酶價格區間較固定,不同類型單價有差異。若是委托實驗平臺操作,有按樣品計費的模式,單個樣品的標簽酶切服務通常200元左右,若需要平臺工作人員協助操作,還需額外加收50%的人工費;也有按蛋白量計費的情況,1-5mg蛋白的標簽酶切費用大概在1000元,蛋白量超出該范圍則需另行詢價。
后續純化的收費:委托平臺純化時,若以大腸桿菌表達系統的1L菌液為單位,一步親和純化的費用大概3500元。若對蛋白純度有更高要求,1-5mg范圍內的蛋白,純度提升到90%收費約1500元,提升到95%則約2500元。還有按樣品計費的方式,單次親和純化樣品的基礎費用約300元,若需工作人員協助,同樣要額外支付人工費;另外,不同純化步數收費也不同,通常純化步數越多費用越高,兩步及三步純化的費用會比一步純化高出不少,具體需結合純化難度調整。若針對GST融合蛋白這類特定標簽蛋白單獨純化,費用大概在600-2800元,具體金額要根據樣品情況和實驗需求確定。






