如何追蹤進(jìn)入活組織的干細(xì)胞(一)
日期:2011-08-31 09:02:52
要達(dá)到這個(gè)目的,我們需要能觀察到,干細(xì)胞到達(dá)活體能呼吸的動(dòng)物中的情況,當(dāng)然科學(xué)家們也可以進(jìn)行組織切片,通過(guò)組織學(xué)尋找細(xì)胞,但是這只能獲得最終狀態(tài)的圖像。
目前研究人員已經(jīng)利用先進(jìn)的成像技術(shù)追蹤進(jìn)入動(dòng)物組織的干細(xì)胞,甚至是進(jìn)入患者體內(nèi)的干細(xì)胞的足跡,其中一些方法依賴于干細(xì)胞上的固定標(biāo)記,還有一些則是遺傳標(biāo)記,能檢測(cè)細(xì)胞是否保持活性,生成蛋白。每一種方法都有其優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn),這主要取決于研究課題,有時(shí)還可以結(jié)合幾種方法,以下是推薦的四種方法,您可以根據(jù)其優(yōu)缺點(diǎn),選擇適合自己的方法。
光學(xué)成像:生物發(fā)光
來(lái)自美國(guó)NIH生物醫(yī)學(xué)影像學(xué)與生物工程學(xué)研究所(National Institute for Biomedical Imaging and. Bioengineering , NIBIB),分子影像和納米研究中心的主任陳小元教授(Xiaoyuan (Shawn) Chen),主要課題之一就是發(fā)展個(gè)性化醫(yī)療,比如依賴于干細(xì)胞的個(gè)性化醫(yī)療方法。
他們所用到的間質(zhì)干細(xì)胞能定位在腫瘤中,并進(jìn)行分化,修復(fù)受損組織,這主要是因?yàn)槭軗p傷的組織會(huì)向這種未特化的細(xì)胞(比如骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞)發(fā)送信號(hào),然后這些干細(xì)胞會(huì)遷移到損傷處并變成組織修復(fù)所需的細(xì)胞類型。腫瘤也同樣能夠號(hào)令這些干細(xì)胞協(xié)助構(gòu)建間質(zhì)或連接組織以支持腫瘤的生長(zhǎng)。
為了能觀察到干細(xì)胞進(jìn)入乳腺癌小鼠后的情況,研究人員首先給小鼠注射了螢光素(luciferin),同時(shí)還在基因中加入的綠色熒光蛋白,上了個(gè)“雙保險(xiǎn)”。這樣研究人員追蹤到了干細(xì)胞進(jìn)入毛細(xì)血管中情況,這些細(xì)胞不僅生存了下來(lái),而且還增殖,和分化。
這種方法觀測(cè)的分辨率是3-5mm。優(yōu)點(diǎn)第一是這種生物發(fā)光的成像方法適合用于小型動(dòng)物成像,不僅便宜,而且容易操作,還可以進(jìn)行高通量實(shí)驗(yàn)。第二是這種成像方法只有在活細(xì)胞中才會(huì)發(fā)光,最后生物發(fā)光成像方法具有高靈敏度,能檢測(cè)最多1000個(gè)細(xì)胞,而且背景很低。
另一方面,這種方法的缺點(diǎn)就是只能穿透幾毫米的組織,因此不能用于大型動(dòng)物和人類。其次這一成像的結(jié)果是平面的,非三維圖像,而且一些細(xì)胞也許會(huì)把這種轉(zhuǎn)基因關(guān)閉,產(chǎn)生假陰性結(jié)果。
儀器方面,來(lái)自美國(guó)的知名藥物研發(fā)機(jī)構(gòu)Caliper Life Sciences公司有提供相關(guān)活體影像系統(tǒng)(In vivo Imaging System,IVIS),這家公司的IVIS小動(dòng)物活體可見光成像系統(tǒng)是在整體動(dòng)物水平上進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的平臺(tái),應(yīng)用范圍包括基因、蛋白質(zhì)、細(xì)菌、細(xì)胞及整體動(dòng)物各個(gè)層次。
目前通過(guò)活體生物螢光成像技術(shù)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)腫瘤發(fā)生發(fā)展的病理過(guò)程、跟蹤干細(xì)胞、病毒、細(xì)菌和藥物在動(dòng)物體內(nèi)的發(fā)展等在歐美醫(yī)學(xué)發(fā)達(dá)國(guó)家是一個(gè)非常重要、發(fā)展迅速的前沿研究領(lǐng)域。據(jù)介紹,許多研究單位和制藥企業(yè)采用了Caliper IVIS活體成像系統(tǒng),發(fā)表論文超過(guò)1000篇,其中在Nature和Science上發(fā)表文獻(xiàn)超過(guò)100余篇。
Caliper的VIS活體成像系統(tǒng)有不同的版本可以選擇,價(jià)格也從10萬(wàn)美元到40萬(wàn)美元不等(注:此處為美國(guó)本地價(jià)格),這主要根據(jù)不同的需要選擇。
試劑方面,Promega公司商業(yè)化的熒光素酶體系是比較著名的,具有簡(jiǎn)單,快速,準(zhǔn)確和靈敏的特點(diǎn),而且通過(guò)簡(jiǎn)化分析過(guò)程,能更快的得到結(jié)果。比如近期推出的pmirGLO dual luciferase miRNA目標(biāo)表達(dá)載體,其雙重報(bào)告分析可以在一個(gè)系統(tǒng)中同時(shí)測(cè)定兩個(gè)報(bào)告基因,并且標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)報(bào)告基因信號(hào),區(qū)別于對(duì)比報(bào)告基因信號(hào)。pmirGLO載體在熒光素酶(luc2)的3UTR插入miRNA目標(biāo)位點(diǎn)。當(dāng)內(nèi)源地或引入的miRNAs結(jié)合到目標(biāo)序列上時(shí)會(huì)產(chǎn)生報(bào)告信號(hào)。這些都有利于螢光的檢測(cè)。






